一、兔肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒实验原理 是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人胰岛素受体α(INSRA)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的人胰岛素受体α(INSRA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 二、兔肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒样本处理要求 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能人上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 三、兔肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒产品优势 1. 品种齐全、质量可靠、灵敏度高、操作简便、稳定性好。 2. 特异性强：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 3. 重复性好：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。 4. 同城（上海）需要代测可免费上门取样，享送货上门服务。 5. 根据客户需求定制elisa试剂盒并提供免费代测服务。 6. 臻科生物可提供专业技术服务,全方位为您解决实验进程中所遇到一切实验问题。 四、兔肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒组成 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 标准品：36U/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存 酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 五、兔肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒注意事项 1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。 2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。 3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。 4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。 5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。 6. 在储存和温育时避免强光直接照射。 7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。 8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。 9. 不能使用过期产品。 10. 实验还需要酶标仪（450nm），37℃恒温箱，高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL以及蒸馏水或去离子水。 11. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 12. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。 13. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。 六、兔肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒操作步骤 1. 对应板孔中加入100μL标准品工作液或样本，37℃孵育90分钟 2. 弃掉板内液体后，立即加入100μL生物素化抗体工作液，37℃孵育60分钟 3. 弃掉板内液体，洗板3次 4. 每孔加入100μL HRP酶结合物工作液，37℃孵育30分钟，弃掉板内液体，洗板5次 5. 每孔加入90μL底物溶液，37℃孵育15分钟左右 6. 每孔加入50μL终止液 7. 立即在450nm波长下读数，处理数据 七、兔肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒实验结果计算 以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。
