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据《铁岭县志》记载，他是名宦后裔，为清汉军镶白旗轻骑都尉高天爵的第五子，后因其兄高其位有军功，雍正皇帝特嘉改汉军镶黄旗。高其佩八岁学画，遇稿辄模，积十余年，盈二簏。随叔父高承爵游宦广东，时广东官衙内有西席吴韦，能以指作画，高其佩受其影响较深。十七岁时丧父，由叔辈高承爵诸人抚养，未应科举，由祖荫在康熙三十三年（1694年），出任姚州牧，次年转任虞部郎。康熙四十年，（1701年）受宿州知县，两年后，内迁工部员外郎。
康熙四十五年（1706年）外放分巡浙江温处道，随后，他在署年轻运使任中，因亏欠盐课丢官。康熙五十四年（1715年），高其佩重踏仕途，出任四川分巡川南水宁道达六年之久，直到康熙五十九年（1720年），升任四川按察使，在成都任职。雍正元年（1723）内迁光禄侍郎，九月升刑部右侍郎。第二年升正红旗汉军都统，仍领刑部右侍郎之衔。雍正五年（1727）七月，因于刑部右侍郎任内定谳中有失，惨遭革职，从此脱离仕途，时年六十七岁。他虽久居他乡，身游宦海，但不忘故乡，在画上常题有：“铁岭高其佩指画”、“铁岭高七郎”、“铁岭古狂”，因此时人对其有“高铁岭”之称。
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高其佩字画真假，高其佩晚年，指画声誉远播朝鲜，但他依然绘画“甲残至吮血，日匿频烧烛”。雍正八年(1730)，应诏圆明园如意馆作画3年，创作了《长江万里图》等细绢工笔画。高秉《指头画说》记载，高其佩曾为兵部尚书卢舜徒写真，画一立像，高与真人相齐。画成后，卢舜徒欢喜若狂道：“神乎技矣！进乎道矣！”
高其佩“扬州八怪”罗聘之师。其艺术才华出众，能诗、工画，他在细绢上所描绘的亭台楼阁、人物、花鸟、鱼虫等等，笔墨精细，设色艳丽，精妙绝伦。他在临摹了大量的前代名人作品，打下了深厚的根基之后，开创了一条新路。大胆地创造出了别具情趣的“舍笔而求之于手”的表现技法。秀水张浦山著的《国朝画征录》中记载：“高且园善指画，画人、山水花鸟、鱼虫、鸟兽，天资超迈，情奇逸趣，信手而得，四方重之”。
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高其佩字画价格，高其佩指画有“叱石成羊”之妙，他创作山水、人物、花鸟、走兽时，均信手一挥而就，“倾刻数十幅，……无不绝人。”他一生的作画数量是惊人的。正如他侄孙高秉在《指头画说》一文中所述：“自弱冠至七旬，不下五、六万幅”。可惜其大部分早已失传。保存下来的多藏于各地博物馆，铁岭县文化馆过去曾存有春、夏、秋、冬四幅《竹》。上海出版社出版的《高其佩》（杨仁恺著）一书，对他的生活和创作道路做了详细的论述，指出他的贡献是：“标题材之新，立结构之异，对当时和后来绘画艺术都有一定影响。”
高其佩的祖父高尚义世居铁岭。明末《凡河重修永宁寺碑记》中有高尚义的名字。开原、铁岭被后金攻取后，高尚义投奔后金，随征松山、杏山有功，皇太极天聪二年，以军功授二等轻车都尉世职，此后从龙入关，顺治初领上海驻防协领。高尚义“从龙入关”，为铁岭高氏带出满门高官。子孙辈中，如高天爵、高承爵、高荫爵、高锡爵、高其位、高其倬、高其佩、高其伟、高其任、高其佑、高其伸、高其伦等均为清朝高官。
高尚义之子高天爵，即高其佩父亲，字君宠，为铁岭贡生，行后任大学士。据清代《国朝先正事略》载：公少读札，善骑射、慷慨重义。顺治四年（一六四七年），任山东高苑县知县，不久升河南信阳知州、长沙知府。顺治十六年（1659年），任江西建昌知府（府治设今南城县），高其佩出生在此地。康熙十三年（1674年），高天爵升任两淮盐运史，未赴任，适逢耿精忠据闽叛，纵党入江西，有人建议高天爵速赴任离开此地，高天爵以“吾守此土十六年，虽代受，岂可速去，当殉此城耳”答之，遂率家丁数十人御贼万年桥。